Como funciona basicamente um espectrofotómetro?

A operação de um espectrofotómetro é basicamente a de iluminar a amostra com luz branca e calcular o montante de luz que é reflectido pela amostra em cada intervalo do comprimento de onda. Isto é feito passando a luz reflectida através de filtros de interferência ou de difracção que dividem a luz em intervalos separados de comprimentos de onda. O instrumento é calibrado usando-se uma cerâmica branca em que a reflexão em cada comprimento de onda é conhecida e comparada com uma superfície que permita uma perfeita difusão. A refletância de uma amostra é expressa entre 0 e 1 (como uma fracção) ou entre 0 e 100 (como uma percentagem). É importante compreender que os valores de reflexão obtidos são valores relativos e, para amostras não fluorescentes, são independentes da qualidade e quantidade de luz usada para iluminar a amostra.